PRÁCTICA 7.                                                                                     

RECUENTO DE SALMONELLA EN PLACA

OBJETIVO: contar la unidades formadoras de colonias que hay en un medio de cultivo en el caso de la salmonella utilizaremos el agar verde brillante.

FUNDAMENTO: Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. 

MATERIAL Y METODOS: placa de cultivo sembrada, y un permanente para marcar los puntos de las colonias.

PROCEDIMIENTOS: cogeremos la placa sembrada de la estufa y solo se contaran aquellas placas en las que haya entre 30 y 300 colonias, ahora en el caso de que estén bien repartidas por toda la placa y sean bastantes podremos dividir la placa en dos y contar todas las de un lado, para el recuento de salmonella debemos contar aquellas que salgan rositas o incoloras sobre un fondo rosa, también podremos aprecias algunas amarillas pero estas no se contaran ya que son E.coli y no nos interesa. Una vez que tenemos contadas todas las de un lado el resultado deberemos de multiplicarlo por dos para obtener aproximadamente el total d colonias que hay en toda la placa.

CÁLCULOS Y RESULTADOS: para obtener el numero de unidades formadoras de colonias tendremos que utilizar esta formula N°de coloniasxFactor de dilución/ volumen ml

En el numero de colonias sera el que hemos obtenido de contar la placa, el factor de dilución dependerá del tubo que hemos seleccionado para sembrar y el volumen final sera aquel que hemos vertido sobre la placa con el cultivo.