PRÁCTICA 3.                                                                                     

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS:uno de los principales objetivos de esta práctica es  el de conocer la elaboración de diferentes medios de cultivos y llevarla a cabo.

FUNDAMENTO: el medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensable para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se pretenda cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y otros mas exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para cecrer.

MATERIALES Y REACTIVOS:agua destilada, medio de cultivo. Probeta, matraz Erlenmeyer, vidrio de reloj, peso, espátula, embudo, microondas, varilla, pipeta, algodón, gasa, papel albal, autoclave, mechero bumsen, placas petri. 

PROCEDIMIENTOS: cogemos una probeta y echamos agua destilada, la cantidad indicada por el fabricante, enrasamos con la pipeta. A continuación pesamos la cantidad de nuestro medio sobre el vidrio de reloj en el peso. Vertemos sobre el agua previamente echada en el magra erlenmeyer con ayuda de un embudo, agitamos lo suficiente hasta que no queden grumos.  Una vez bien disuelto lo metemos en el microondas hasta que veamos que burbujea, sacamos agitamos y repetimos el proceso dos veces mas. Ahora vamos a colocar un tapón hecho con una bola de algodón envuelta en la gasa. Ponemos papel albal sobre el tapón metiendo antes un papelito indicando el tipo de medio que hemos preparado. Ahora ya podemos meterlo en el autoclave para esterilizarlo.
*para los medios que preparamos en tubo inclinado y tubo liquido se echan en los tubos antes de meter al autoclave. 
Una vez que a terminado sacamos y dejamos enfriar a temperatura ambiente. En el caso de tubo inclinado los apoyaremos sobre una gradilla para darles la forma. (Agar slant). 8ml
Para las placas petri, utilizaremos un mechero bumsen con el que crearemos un ambiente estéril donde trabajaremos para echar el medio del matraz erlenmeyer a las placas. Se echaran sobre unos 9ml en cada placa.
Una vez enfriados todos procederemos a guardarlos en el frigo hasta que sembremos.
TIPOS DE MEDIOS.
Agar Mackonkey : medio diferencial de bacterias fermentadoras de lactosa y de no fermentadoras. Coliformes totales. Encontramos entrep las fermentadoras de lactosa la Escherichia coli, klebsiella, enterobacter en color rojo y no fermentadoras de lactosa la salmón el la, siella, proteus en color blanco. Temperatura de conservación entre 35-37°C durante 18/48horas.
PCA: medio no selectivo en el que crece todo. E.como, staphilococcus, estreptococus , bacillus. Con una temperatura de 32-37° C y entre 24-48h.
Agua pectonada: medio de enriquecimiento no selectivo, E.como, staphilococus, pseudomonas.. En un color ámbar claro es para medios líquidos. 35-37°C 18-24H.
Endo: medio para coliformes totales, crecen Gram -, y son inhibidos los Gram +, las fermentadoras de lactosa aparecen en un color rojo como la E.coli, con un brillo rojo metálico, las no fermentadoras de lactosa como la salmonella o Shigella incoloras. 35-37°C 18/24h.
Verde brillante: medio selectivo para aislamiento de Salmonella. E como aparece amarilla sobre fondo amarillos y la salmonella rosa sobre fondo rosa. T° 35-37° 24H
Atar levine: para coliformes fecales, medio diferenciador y selectivo para aislamiento de E.coli. con un fondo de brillo verde metálico y de color negro azulado y salmón el la, shigella, proteja, incoloras. T° 35-37° 18-48H
Slanetz Barley: medio selectivo para enterococs fecales. No crece E.coli. T°44° contaremos las colonias rosas granates.
CALCULOS: una regla de tres dependiendo del medio que utilizamos siguiendo lo indicado en cada bote por el fabricante.

AUTOCLAVE : Se rellena el autoclave con agua destilada (H20) hasta cubrir los orificios que hay en la parte inferior del depósito. (Comprobar que la válvula del agua se encuentra cerrada)

2.- Se introduce el material que se quiere esterilizar en el interior de una cesta metálica perforada.

3.- Se cierra la puerta girando la manivela en la dirección de las agujas del reloj.

4.- El aparato consta de 2 válvulas que en el momento del encendido deben permanecer la del agua (drain) cerrada       y la del vapor (steam) abierta.       

5.- Se pulsa el botón de encendido (verde), y seguidamente el de start/stop en la zona del display.

6.- Al llegar a los 90-100ºC (a los 19 min aprox.) se cierra la válvula del vapor (steam). Se quedaran las 2 válvulas así: 

7.- Al llegar a los 121ºC y 1,1 atm de presión, comenzara una cuenta atrás de 20 min. Al terminar ese tiempo el autoclave pitara y podremos abrir poco a poco la válvula del vapor (stream) para que la presión vaya bajando poco a poco.

8.- La Tª y la presión comenzaran a bajar. Cuando la presión llegue a 0 y la Tª a unos 90-100ºC se gira completamente la válvula del vapor      ,ya se puede ir abriendo la puerta poco a poco para que el vapor vaya saliendo.

9.- Se saca la cesta con el material esterilizado y se abre la válvula del agua (drain) para desaguarla      . El proceso en ese momento habrá finalizado.