PRÁCTICA 4

PRÁCTICA 4.                                                                                     

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS 

OBJETIVO: Sembrar en un tipo de medio especial en función de lo que queremos cultivar y de una forma u otra microorganismos para favorecer su crecimiento.

FUNDAMENTO:Sembrar es introducir una porción de muestra  en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. 
Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen: 
Que se efectúen asépticamente,que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados, que se realicen solo los manipuleos indispensables, que se trabaje fuera de toda corriente de aire. Utilizando para ello un mechero bunsen.

MATERIAL Y REACTIVOS: tubos de ensayo, mechero bunsen, espátula de Grisalky, pipetas esterilizadas, placa petri con medio de cultivo, agua destilada estéril, muestra de agua, asa de siembra, vaso de precipitados.

PROCEDIMIENTOS: para la siembra de microorganismos en césped, utilizaremos tubos de ensayo en los que mediremos con una pipeta esterilizada 9 ml de agua destilada estéril (abriremos para extraer el agua siempre cerca del mechero bunsen para que no se pierda la condición de esterilidad) en cada tubo, a continuación cogeremos 1ml de la muestra de agua que queremos sembrar y lo mezclaremos en el tubo 1 a partir de aquí hiremos haciendo diluciones seriadas con el resto de los tubos, extrayendo de la mezcla del tubo 1, 1ml que depositaremos en el tubo 2 h así sucesivamente. Tubo 1 tendrá una dilución 10 tubo 2 100 tubo 31000 y tubo 4 10000 (esto lo utilizaremos a la hora de contar las unidades formadoras de colonias de una placa). Cogeremos 0'5ml con una micropipeta esterilizada de uno de los tubos y en condiciones de esterilidad lo verteremos con cuidado sobre una placa petri previamente cultivada y solidificada, ahora con ayuda de una espátula grisalnsky iremos esparciendo por toda la superficie hasta su completa absorción. Se dejara crecer en la estufa a las condiciones de temperatura necesarias para cada medio y durante el tiempo necesario.

Siembra de microorganismos por agotamiento:  en condiciones de esterilidad, cogeremos un asa de siembra y la quemaremos en el mechero bunse para esterilizar, a continuación introduciremos sobre una muestra de agua y la llevaremos sobre la placa petri, el inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente. Esto lo utilizaremoz para obtener colonias aisladas. Tras hacer las primeras estrías y quemar el asa repetiremos la acción pasando el asa la primera y la segunda vez sobre las primeras, en la tercera parte repetiremos el mismo proceso y en la cuarta solo pasaremos una vez por encima.

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel:  con un asa de siembra previamente esterilizada con el mechero bunsen la introducimos en la muestra de agua y  el asa de siembra en el tubo inclinado, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada  y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo. Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el  material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

CÁLCULOS Y RESULTADOS: en esta practica no necesitamos realizar ningunos cálculos y los resultados que obtengamos los veremos en el recuento de microorganismos

IMÁGENES: