PRÁCTICA 6.                                                                                     

PREPARACION DE ESCALA DE MACFARLAND 

OBJETIVO: medir las células vivas y muertas presentes en una muestra de agua.

FUNDAMENTO: En microbiología, los estándares de turbidez de McFarland se usan como referencia en suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectofotometros.

Los estándares pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en salina estéril o en caldos. Si la suspensión es demasiado turbia, puede añadirse diluyente, y si no es lo suficiente turbia, se puede agregar más bacterias. La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para estimar el número de bacterias.La desventaja de este método es que no discrimina a las bacterias vivas de las muertas en la solución, por lo que se puede sobreestimar la población de bacterias.

Casos específicos en los que se usa es en el de antibiogramas o pruebas de sensibilidad, donde es necesario para estandarizar el método y se eviten falsos positivos o negativos.

MATERIALES Y REACTIVOS: probetas, piipetas, Barillas, peso, vidrio de reloj, espátula, matraz, tubos de ensayo, grabillas, cubetas, agua destilada, muestra de siembra en agua pectonada, agua pectonada, cloruro de bario BaCl2 0,048M y ácido sulfúrico H2SO4 0,36M, muestra de agua.

PROCEDIMIENTOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS: Preparamos las disoluciones de cloruro de bario y de ácido sulfúrico como hemos estudiado en el trimestre anterior, midiendo la cantidad de cada sustancia y mezclándola con agua destilada. A partir de las disoluciones preparadas, procederemos a realizar los tubos que utilizaremos para medir en el espectrofotómetro

Medimos en el espectofotómetro la absorbancia de cada tubo en orden de menos concentrado a mas después de haber realizado un blanco con agua destilada, obtendremos la absorbancia de cada tubo para realizar la recta de calibrado. A continuación cogemos un tubo de agua pectinada sembrado y realizamos el blanco con solo agua pectonada, a continuación tendremos la absorbancia de nuestra muestra que sera el valor de Y.

Ahora procedemos a realizar los cálculos 

Donde xi sera el numero de células/ml  y la yi la absorbancia que hemos calculado de cada tubo.